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關于鱟試驗法中假陽性結果的解決方法

發布時間: 2022-11-11  點擊次數: 1478次

樣品中混入細菌內毒素發生凝集,由形成凝膠的有無來檢測樣品中的內毒素,然而試劑除了內毒素反應外,它同時也會對內毒素以外的其他物質存在凝集反應。因此,勢必會形成假陽性或假陰性的實驗結果。這就是試驗法中的特異性問題。

 

對于假陽性結果的問題可以說十分復雜。因為對于大多數樣品來說,主要都為假陰性情況較多,而對于假陽性結果的判斷和排除是很困難的。當我們對一個樣品用試驗法檢測出陽性結果時一可以說是由于內毒素超過限值所引起,二也可以理解為假陽性結果。因此我們在實驗時要特別注意區分。

 

 

在假陽性結果的研究過程中,最-突出的是有關G因子反應系被激活所形成的凝膠化反應,即一般的試劑由于含有G因子也可被1,3-β-D-glucan葡聚糖所激活而使產生凝集反應,從而形成假陽性結果。

關于1,3-β-D-glucan它是在1981年由Adinuma所發現一種抗癌藥,能使試劑產生凝固。國外報道該物質在10ng/ml時就可使試劑凝固。根據我們的試驗發現不同廠家的試劑可在2.5 ~10ng/ml范圍內使試劑凝固。該物質廣泛存在于擔子菌、真菌、地衣類、酵母和藻類的菌體成分中。另外,某些用人造纖維造的人工腎透析膜上也含有類似物質,它可引起家兔升溫。

 

1,3-β-D-glucan對熱極為穩定。高壓121℃并不能使其滅活。需2502小時加熱滅菌才能使其滅活。因此要想防止假陽性結果的產生必須要排除1,3-β-D-glucan,使其不能激活G因子而形成凝膠。

國外在80年代后對此進行了許多的研究和改進。目前已開發出僅對內毒素起反應的專試劑。只與內毒素起反應的試劑有日本生化學工業株式會社生產的Endospecy,它是將東方裂解液中各組分提取后重組,重組時不加G因子,另一種是日本和光純藥株式會社生產的ES =,它是美洲裂解液中加大刃羧甲基curdaln封閉G因子。同時國外也開發出只與1,3-β-D-glucan起反應的試劑由蠶中提取而來的新型的SLP試劑。和光以及日本化學工業株式會社生產的Gluspecy。

 

對于大多數樣品來說,由于使用特異性試劑與非特異性試劑對其結果是沒有差異的。因此在一般情況下可以不必考慮只有在確實認定有干擾時,才考慮使用特異性試劑以排除干擾。

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